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當前位置:首頁新聞中心BD biocoat 基質(zhì)膠和細胞檢測系統(tǒng)

BD biocoat 基質(zhì)膠和細胞檢測系統(tǒng)

更新時間:2017-09-08點擊次數(shù):780

產(chǎn)品貨號354230  354234  356230  356231  356234  356235  356237       

儲存和運輸-20儲存,干冰運輸。

操作指南

BD采用技術(shù),從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中分離出BD Matrigel 基底膜基質(zhì),其主要成分由層粘連蛋白,IV型膠原,巢蛋白,硫酸肝素糖蛋白等組成,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。BD Matrigel 基底膜基質(zhì)在室溫條件下,聚合形成具有生物學活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化,以及對細胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。

BD Matrigel 基底膜基質(zhì)形成的三維培養(yǎng)機制,可促進上皮細胞、肝細胞、Sertoli細胞、黑色素瘤細胞、血管內(nèi)皮細胞、甲狀腺細胞及毛囊細胞等的貼壁與分化。同時,Matrigel 還能影響乳腺上皮細胞的蛋白表達,支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細胞的分化,高濃度的Matrigel 適用于研究體內(nèi)血管生成和腫瘤細胞遷移及腫瘤模型的建立等。

Matrigel 基質(zhì)會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的。但是與5%CO2平衡后色差即會減少。凍融后,輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境中進行。試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。應(yīng)使用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。細胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質(zhì)層表面生長,也可在1mm厚度的Matrigel三維基質(zhì)內(nèi)生長。過度稀釋的Matrigel會形成非膠質(zhì)的蛋白層,也可以用于細胞貼壁,但不能用于細胞的分化研究。

注意:

1.可將凍融后的Matrigel分裝在多個小管,所有分裝均需用預冷的凍存管,迅速冷凍并保存,避免多次凍融。

2.Matrigel22-35溫度環(huán)境下快速成膠,因此溶解時在4冰上過夜凍融(4時會隨著溫度的上升部分成膠)。所有用品在使用前需置于冰浴,必須使用預冷的移液管、吸頭及小管操作Matrigel。成膠后的Matrigel可以在424-48小時后重新呈液態(tài)。

推薦包被與成膠方法:

注意:為了保證Matrigel基質(zhì)膜的成膠性能與穩(wěn)定性,稀釋濃度不應(yīng)低于1:3,可用無血清培養(yǎng)基稀釋,Matrigel成膠后立即使用。

薄膠成膠方法:

凍融后,用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。

將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,加入濃度為50ul/cm2生長面積的Matrigel基質(zhì)。

37放置30分鐘,即可使用。

厚膠成膠方法:

凍融后,用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴,將培養(yǎng)的細胞與Matrigel基質(zhì)混合,用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為150-200ul/cm2生長面積的Matrigel基質(zhì)。在37放置30分鐘,可成膠。可以加入細胞培養(yǎng)的基質(zhì),可以是細胞直接生長在膠表面。

薄層包被方法:

凍融后,用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。根據(jù)使用需要,采用無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel基質(zhì),根據(jù)實驗需要確定*包被濃度。將稀釋的Matrigel基質(zhì)包被于所需的培養(yǎng)器皿中,包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育1小時。去除未結(jié)合的Matrigel,用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。用BD細胞回收劑(354253)或離散酶(354235)可降解Matrigel基質(zhì),冰浴7小時候回收得到細胞。

 

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